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21个步骤析出DNA
“通过两年多的努力,我们获得了中国合格评定国家认可委员会(CNAS)的国家实验室认可资格,取得了认可证书。”市中心血站工作人员称,从2010年上半年,他们开始准备实验室认可工作,以血站作为一个大的实验室参加实验室的认可工作,这在采供血机构是首家。据悉,市中心血站2011年6月份通过文件评审,2011年10月份通过实验室的现场评审,近日通过中国合格评定国家认可委员会(CNAS)的国家实验室资格认可,取得认可证书。

  “我们实验室包括三个。”输血医学研究所副主任冯智慧称,组织配型实验室、免疫遗传实验室、干细胞研究实验室和血型参比实验室,其中免疫遗传实验室就是做亲子鉴定的。

  “我们经常接到市民的电话咨询是否可以进行亲子鉴定。”冯智慧称,近几年他们每个月都能接到这种电话,前不久他还接到了一名男子的电话称,孩子现在两岁了,他怀疑孩子不是亲生的,想鉴定一下。据介绍,在咨询的这部分人群中除了有怀疑孩子不是亲生的之外,还有打拐的以及认亲的。

  “其实亲子鉴定这部分工作我们在2006年就开展了。”冯智慧说,不过那个时候不是针对亲子鉴定来做的,而是造血干细胞移植后期检测。患者做完干细胞移植之后,是别人的干细胞到了自己的体内,这样后期就得看看别人的干细胞在自己体内长得如何,这个检测流程和检测过程中使用的试剂跟做亲子鉴定是一模一样的,后期的分析结果也都是一样的,只不过最后出的结果不同,一个结果是生长情况,另一个结果是是否具有亲子关系。

  据介绍,市民做亲子鉴定时,需要出示有效证件(如身份证、小孩出生医学证明、户口簿、结婚证或离婚证、护照、军官证或士兵证、通行证等)。在采集血样前需要填写《司法鉴定程序记录表》《司法鉴定案例基本信息登记表》有关内容。年幼或无书写能力的当事人可直接摁右手大拇指和食指指印或右脚脚印。

 20多个步骤找到生命密码

  亲子鉴定究竟是如何进行的呢?12日记者走进实验室进行了探访,据介绍,在进行亲子鉴定时先抽血,然后从血液中提取DNA ,再将DNA进行扩充,最后对DNA中位点数据进行比对,这样就可以判断是不是亲生了。工作人员称,试验中每个环节,包括实验时间中对时间的把握,不能有一点偏差。

  采集血样严防掉包

  “做亲子鉴定首先得进行采血。”冯智慧称,他们实验室可以通过血斑、口腔拭子以及ACD 抗凝血液标本进行鉴定,不过用血斑以及口腔拭子做标本不利于长期保存,所以他们做的是ACD抗凝血液标本,也就是从胳膊上采3~5毫升外周血。

  “为了保证不出差错,防止掉包,采血时至少有两名工作人员。”冯智慧说,按照要求,标本采集接收现场必须有两名以上工作人员,任何人不得单独采集血当事人标本。

  21个步骤析出DNA

  血样采集完后,就开始提取里边的DNA了。当天实验室正好有做干细胞移植进行配型的,需要从血液中提取DNA,记者便走进实验室看看如何提取。冯智慧说,提取DNA的每一步都需要人工操作,一共有21步,需要两三个小时的时间,先后需要加入五种试剂。

  冯智慧称,由于DNA是藏在白细胞的细胞核里,所以要先除去红细胞,然后让白细胞的细胞核裂解开,把藏在里边的DNA释放出来。“做这一步的时候把样本放在震荡仪上,震荡仪边晃动边加热,加快DNA释放。”冯智慧称,DNA被释放出来之后,还要除去样本中的蛋白,这又需要把样本放到0℃~5℃的冰箱中冷藏。

  记者在实验室看到,样本被冷藏 10分钟之后,工作人员将其拿了出来,然后放在了离心机里边。“我们要对它进行离心5分钟,这样蛋白红细胞就会跟DNA 彻底分离开。”经过10分钟的离心后,工作人员取出了样本,记者看到离心管里的液体被分成了两个层面,最下边的一层看上去有些暗红。“这个暗红色的就是需要分离出去的部分。”工作人员解释说。

  “DNA就在这部分清澈透明的液体中,下一步就是把它提取出来。”工作人员将冷藏的乙醇倒入透明液体后,然后将管子进行颠倒晃动,不久里边就出现了白色棉絮状的东西。“这白色棉絮状东西就是DNA。”工作人员称,这还没有结束,还需要继续进行离心,将这些白色棉絮状的物体析出。过了5分钟,工作人员将其从离心机取出。这时,记者看到在离心管的最底端有一个绿豆粒大小的白点。“这个白点就是我们要的东西。”

变换温度让DNA繁殖

  “析出来的这部分DNA太少了,如果做实验肯定是不够用的,所以我们还得进行扩增。”冯智慧说。

  记者看到,工作人员将测量好浓度的DNA 可扩增剂加在一起,放进专用的仪器上。“这个步骤需要三个钟头。”工作人员称,在这个过程中温度是需要不断改变的,需要好几种温度交换进行。据介绍,DNA是两条链,扩增就得把链打开,然后每条链和所需要的材料结合。“链打开时需要一种温度,结合时需要另一种温度,所以在这个过程中温度是需要不断变化的。”工作人员解释说。

  让DNA“跑位”采集数据

  “DNA 扩增后,就开始进行位点比对了。”冯智慧称,这个过程需要将DNA放入到一个完全封闭的仪器中,把它固定在一个位置,然后用电脑来操作机器。“这个过程中,DNA 会按照电脑发出的指令,从这头跑到那头。”工作人员称,这样DNA上的所有信号都会被机器收集下来。

  据介绍,在一般情况下,设备会自动提取15个位点,最后再根据位点的型别套入公式进行计算,判断是否是亲子关系。

  “试剂不同,位点相同的数量也不一样,拿我们用的试剂来说,如果有三个以上位点不同,就直接排除亲子关系了。”冯智慧说,如果不同的位点在三个以内,不能排除基因突变造成的不同,这种情况下还需要加做位点再次对比。据介绍,整个亲子鉴定过程需要5到10个工作日。



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